Binago ng fluorescence microscopy ang aming kakayahang makita at pag-aralan ang mga biological specimen, na nagbibigay-daan sa aming pag-aralan ang masalimuot na mundo ng mga cell at molecule. Ang isang mahalagang bahagi ng fluorescence microscopy ay ang pinagmumulan ng liwanag na ginagamit upang pukawin ang mga fluorescent molecule sa loob ng sample. Sa paglipas ng mga taon, iba't ibang mga pinagmumulan ng liwanag ang ginamit, bawat isa ay may mga natatanging katangian at pakinabang.
1. Mercury Lamp
Ang high-pressure mercury lamp, mula 50 hanggang 200 watts, ay ginawa gamit ang quartz glass at spherical ang hugis. Naglalaman ito ng isang tiyak na halaga ng mercury sa loob. Kapag ito ay gumagana, ang isang discharge ay nangyayari sa pagitan ng dalawang electrodes, na nagiging sanhi ng mercury upang sumingaw, at ang panloob na presyon sa globo ay mabilis na tumataas. Ang prosesong ito ay karaniwang tumatagal ng mga 5 hanggang 15 minuto.
Ang paglabas ng high-pressure na mercury lamp ay nagreresulta mula sa pagkawatak-watak at pagbabawas ng mga molekula ng mercury sa panahon ng paglabas ng electrode, na humahantong sa paglabas ng mga light photon.
Naglalabas ito ng malakas na ultraviolet at blue-violet na ilaw, na ginagawang angkop para sa kapana-panabik na iba't ibang fluorescent na materyales, kaya naman malawak itong ginagamit sa fluorescence microscopy.
2. Mga Xenon Lamp
Ang isa pang karaniwang ginagamit na white light source sa fluorescence microscopy ay ang xenon lamp. Ang mga Xenon lamp, tulad ng mga mercury lamp, ay nagbibigay ng malawak na spectrum ng mga wavelength mula sa ultraviolet hanggang sa near-infrared. Gayunpaman, naiiba sila sa kanilang spectra ng paggulo.
Itinutuon ng mga mercury lamp ang kanilang pagbuga sa malapit sa ultraviolet, asul, at berdeng mga rehiyon, na nagsisiguro sa pagbuo ng mga maliliwanag na fluorescent signal ngunit may malakas na phototoxicity. Dahil dito, ang mga HBO lamp ay karaniwang nakalaan para sa mga nakapirming sample o mahinang fluorescence imaging. Sa kabaligtaran, ang mga pinagmumulan ng xenon lamp ay may mas malinaw na profile ng paggulo, na nagbibigay-daan para sa mga paghahambing ng intensity sa iba't ibang mga wavelength. Ang katangiang ito ay kapaki-pakinabang para sa mga aplikasyon tulad ng mga pagsukat ng konsentrasyon ng calcium ion. Ang mga Xenon lamp ay nagpapakita rin ng malakas na paggulo sa malapit-infrared na hanay, lalo na sa paligid ng 800-1000 nm.
Ang mga XBO lamp ay may mga sumusunod na pakinabang kaysa sa mga HBO lamp:
① Mas pare-parehong spectral intensity
② Mas malakas na spectral intensity sa infrared at mid-infrared na rehiyon
③ Mas malaking output ng enerhiya, na ginagawang mas madaling maabot ang aperture ng layunin.
3. LEDs
Sa mga nakalipas na taon, isang bagong kalaban ang lumitaw sa larangan ng fluorescence microscopy light sources: LEDs. Ang mga LED ay nag-aalok ng kalamangan ng mabilis na pag-on-off na paglipat sa mga millisecond, pagbabawas ng mga oras ng pagkakalantad ng sample at pagpapahaba ng habang-buhay ng mga maselan na sample. Higit pa rito, ang LED na ilaw ay nagpapakita ng mabilis at tumpak na pagkabulok, na makabuluhang binabawasan ang phototoxicity sa mga pangmatagalang live na eksperimento sa cell.
Kung ikukumpara sa mga puting ilaw na pinagmumulan, ang mga LED ay karaniwang naglalabas sa loob ng mas makitid na spectrum ng paggulo. Gayunpaman, maraming LED band ang magagamit, na nagbibigay-daan para sa maraming nalalaman na multi-color fluorescence application, na ginagawang mas popular ang mga LED sa modernong fluorescence microscopy setup.
4. Lasers Light Source
Ang mga pinagmumulan ng ilaw ng laser ay lubos na monochromatic at direksyon, na ginagawang perpekto ang mga ito para sa high-resolution na microscopy, kabilang ang mga super-resolution na diskarte gaya ng STED (Stimulated Emission Depletion) at PALM (Photoactivated Localization Microscopy). Karaniwang pinipili ang ilaw ng laser upang tumugma sa tiyak na wavelength ng excitation na kinakailangan para sa target na fluorophore, na nagbibigay ng mataas na selectivity at precision sa fluorescence excitation.
Ang pagpili ng fluorescence microscope light source ay depende sa mga partikular na pang-eksperimentong kinakailangan at sample na katangian. Mangyaring huwag mag-atubiling makipag-ugnayan sa amin kung kailangan mo ng anumang tulong
Oras ng post: Set-13-2023